Bayam merah mengandung zat kalsium yang bermanfaat untuk sumber kalsium tubuh manusia. Pemanfaatan bayam merah di masyarakat sampai saat ini belum optimal, karena bayam merah memiliki aroma yang “langu”. Salah satu solusi agar masyarakat tetap dapat mengkonsumsi bayam merah dilakukan dengan subtitusi bayam merah ke dalam klepon. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui kandungan kalsium (Ca) pada klepon yang disubtitusi dengan bayam merah pada konsentrasi yang berbeda. Pengukuran kadar kalsium (Ca) klepon menggunakan alat spektrofotometer dengan metode titrasi. Analisis data dilakukan dengan uji ANOVA satu jalur menggunakan SPSS 16. Optimalisasi produk klepon bayam merah dilakukan dengan uji organoleptik terhadap warna, aroma, rasa dan tekstur klepon. Hasil pengukuran kadar kalsium (Ca) klepon menunjukkan peningkatan terbaik terdapat pada subtitusi bayam merah 100% (P4). Hasil uji ANOVA menunjukkan kadar kalsium klepon setelah disubtitusi dengan bayam merah berbeda secara signifikan dengan nilai Fhit > Ftabel (139,03 > 3,05). Hasil uji BNT (LSD) terhadap kadar kalsium klepon menunjukkan antar perlakuan berbeda secara signifikan pada taraf signifikansi 5%. Hasil Uji Duncan terhadap kadar kalsium klepon menunjukkan bahwa hasil tertinggi kadar kalsium klepon terdapat pada perlakuan P4 (100%) yaitu 64,3433 ppm. Hasil organoleptik menunjukkan bahwa klepon E (subtitusi bayam merah 100%) merupakan perlakuan yang paling baik dengan jumlah skor tertinggi sebesar 752. Berdasarkan hasil tersebut kadar kalsium klepon setelah disubtitusi dengan bayam merah dapat meningkat secara signifikan pada konsentrasi yang berbeda.