Glikosida sianogenik merupakan senyawa hidrokarbon yang terikat dengan gugus CN dan gula serta berpotensi terurai menjadi asam sianida (HCN) yang bersifat racun. Kandungan senyawa glikosida sianogenik ditemukan pada spesies Dioscorea spp. Tujuan penelitian ini adalah menganalisis karakteristik tiga macam tepung umbi Dioscorea spp., mengukur kadar glikosida sianogenik tiga macam tepung umbi Dioscorea spp., dan menganalisis kesesuaian batas aman kadar glikosida sianogenik tiga macam tepung umbi Dioscore spp. terhadap ketentuan SNI. Analisis tepung umbi Dioscorea spp. meliputi karakteristik tepung dan kandungan glikosida sianogenik menggunakan metode spektrofotometri Vis. Analisis statistik menggunakan uji ANOVA dan DMRT. Hasil menunjukkan bahwa karakteristik warna, tekstur, dan aroma tiga macam tepung umbi Dioscorea spp. mendekati syarat SNI 01-3751-2009 antara lain berwarna putih, tekstur halus, dan bau normal. Kandungan glikosida sianogenik tepung umbi uwi (Dioscorea alata L.) sebesar 0,034±0,000 ppm/10mg, tepung umbi gadung (Dioscorea hispida Dennst) 0,029±0,000 ppm/10mg dan tepung umbi gembili (Dioscorea esculenta L.) 0,024±0,000 ppm/10mg. Kadar glikosida sioanogenik tiga macam tepung umbi berbeda nyata pada taraf signifikansi 0,05. Kadar glikosida sianogenik ketiga tepung umbi masih dalam batas aman untuk dikonsumsi ,sesuai dengan persyaratan SNI tepung mokaf (maksimal sebesar 10 ppm).