Jerawat merupakan masalah kulit yang umum terjadi akibat kolonisasi bakteri dan peradangan. Penggunaan antibiotik sintetis jangka panjang dalam terapi jerawat telah menimbulkan masalah resistensi, sehingga diperlukan alternatif bahan aktif alami dalam mengurangi risiko resistensi. Madu lebah hutan (Apis dorsata) diketahui mengandung senyawa bioaktif dengan aktivitas antibakteri dan antiinflamasi. Namun, belum cukup banyak penelitian yang melaporkan bioaktivitas madu lebah hutan asal Indonesia sebagai antibakteri dan antiinflamasi. Penelitian ini bertujuan untuk mengevaluasi aktivitas antibakteri dan antiinflamasi ekstrak fraksi madu lebah hutan dari empat daerah, yaitu AD1 (Riau), AD2 (Maluku Utara), AD3 (Jawa Barat), dan AD4 (Nusa Tenggara Timur), serta menilai potensi ekstrak fraksi terpilih dalam formulasi serum anti-acne. Fraksinasi dilakukan menggunakan pelarut n-heksana, etil asetat, dan air. Uji antibakteri dilakukan terhadap Propionibacterium acnes, Staphylococcus aureus, dan Pseudomonas aeruginosa dengan metode difusi cakram, sedangkan uji antiinflamasi menggunakan metode inhibisi denaturasi protein dengan bovine serum albumin (BSA). Hasil penelitian menunjukkan bahwa ekstrak fraksi etil asetat AD4 pada konsentrasi 100.000 bpj memiliki zona hambat tertinggi terhadap P. acnes (12,34 ± 0,025 mm) dan S. aureus (4,11 ± 0,025 mm), namun tidak menunjukkan aktivitas terhadap P. aeruginosa. Ekstrak fraksi etil asetat AD4 juga menunjukkan aktivitas antiinflamasi tertinggi, yaitu 43,65 ± 0,22 % pada konsentrasi 1.000 bpj sehingga dipilih dalam formulasi serum anti-acne. Sediaan anti-acne berbahan aktif ekstrak fraksi madu lebah hutan telah berhasil diformulasikan dengan karakteristik diantaranya: tekstur sediaan homogen, daya sebar 5,2 cm, pH 6,5, zona hambat P. acnes 14,48 ± 0,036 mm, S. aureus 6,23 ± 0,035 mm dan aktivitas antiinflamasi 53,38 ± 0,22 %.