Culex quinquefasciatus merupakan vektor utama penyakit filariasis yang masih menjadi masalah kesehatan di daerah tropis. Penyakit ini dapat menyebabkan kecacatan permanen seperti pembengkakan jaringan (lymphedema) yang berdampak signifikan terhadap kualitas hidup penderitanya. Penggunaan Bacillus thuringiensis (Bt) sebagai larvasida hayati menjadi alternatif ramah lingkungan dibandingkan insektisida kimia. Penelitian ini bertujuan untuk membandingkan toksisitas dua isolat Bt lokal asal Semarang yaitu BTS1 (asal wilayah perkotaan) dan BTS2 (asal wilayah kabupaten dengan larvasida komersial Bactivec (BAC) terhadap larva Culex quinquefasciatus instar III. Uji toksisitas dilakukan pada dua waktu pengamatan yakni 20 jam dan 24 jam. Isolat Bt lokal diuji dengan variasi dosis 0,1 ml; 0,3 ml; 0,5 ml; 0,7 ml; 1 ml; dan 3 ml, sedangkan Bactivec diuji dengan dosis lebih rendah, yaitu 0,0001 ml; 0,0005 ml; 0,0007 ml; 0,001 ml; 0,003 ml; dan 0,01 ml. Nilai LC₅₀ dan LC₉₀ dianalisis menggunakan regresi probit. Hasil menunjukkan bahwa pada pengamatan 20 jam, nilai LC₅₀ berturut-turut adalah Bactivec = 0,000624 ml; BTS1 = 00,816 ml; dan BTS2 = 1,210 ml. Adapun nilai LC₉₀-nya adalah Bactivec = 0,00171 ml; BTS1 = 1,161 ml; dan BTS2 = 2,692 ml. Sementara pada 24 jam, nilai LC₅₀ adalah Bactivec = 0,000612 ml; BTS1 = 0,788 ml; dan BTS2 = 1,007 ml. Nilai LC₉₀-nya adalah Bactivec = 0,00142 ml; BTS1 = 1,148 ml; dan BTS2 = 1,907 ml. Urutan efektivitas dari yang paling toksik adalah Bactivec > BTS1 > BTS2. Selain itu, perlakuan Bt juga menyebabkan perubahan morfologi larva seperti warna tubuh yang lebih gelap, kerusakan pada abdomen, dan pembengkakan, terutama setelah 24 jam. Isolat lokal BTS1 menunjukkan potensi sebagai biolarvasida alternatif meskipun masih di bawah efektivitas Bactivec.