Pandemi COVID-19 telah melumpuhkan berbagai sektor yang ada di Indonesia sehingga pemerintah harus mengelurkan sebuah kebijakan darurat, salah satunya sektor pendidikan. Pembelajaran daring yang merupakan kebijakan baru, telah membatasi pembelajaran biologi. Dalam pembelajaran biologi yang terdapat praktikum, peserta didik merasa kesulitan karena terkendala dengan instruksi yang kurang jelas dan terbatasnya alat adan bahan. Tujuan penelitian ini adalah mengembangkan, menganalisis validitas dan menjelaskan kelayakan petunjuk praktikum biologi kelas X MIPA sebagai alternatif praktikum mandiri selama pandemi COVID-19. Dengan metode yang digunakan adalah penelitian pengembangan atau Research and Development (R&D). Desain pengembangan diselaraskan dengan model Analysis – Design – Develop – Implement –Evaluate (ADDIE) yang dikembangkan oleh Molenda dan Reiser (2003). Pengumpulan data menggunakan metode observasi, wawancara, dan kuesioner (angket). Pengembangan petunjuk praktikum memfasilitasi 6 bab materi yang ada di kelas X MIPA dengan pelaksanaan praktikum menyesuaikan kondisi lingkungan rumah masing-masing peserta didik. Hasil penelitian dan pengembangan produk petunjuk praktikum melalui tahap validasi oleh para ahli didapatkan hasil persentase dari ahli materi 79,1%, ahli metodologi pembelajaran 91,7%, ahli media 70,8 % dan praktisi lapangan 80,5%. Sehingga memiliki kualitas layak berdasarkan uji coba skala kecil di SMA Negeri 8 Semarang.