Tradisi meminum air gentong telah lama dilakukan para peziarah di makam Sunan Kalijaga. Air tersebut berasal dari sungai yang diendapkan kedalam bak penampungan dan disalurkan kedalam gentong melewati penyaringan (filter). Namun tidak ada proses sterilisasi biologis melalui perebusan maupun radiasi sinar UV untuk mematikan mikroorganisme yang dapat tumbuh di air yang menjadikan air tidak layak konsumsi. Air minum yang tidak layak konsumsi dapat menyebabkan gangguan pada saluran pencernaan. Oleh karena itu perlu dilakukan penelitian mengenai kelayakan konsumsi air gentong secara kimiawi, fisik, dan mikrobiologis. Tujuan dari penelitian ini untuk mengetahui kondisi fisik dan kimia serta sifat biologis berdasarkan keberadaan mikroba Coliform pada air gentong. Jenis dari penelitian ini adalah deskriptif kualitatitf. Hasil penelitian menunjukkan sifat fisik dan kimia air gentong yaitu air jernih (tidak berwarna), tidak berbau, tidak berasa, suhu ±0,1 ℃- ±2,6 ℃, pH 7,36-7,83, TDS= 253-285 ppm, DO= 0,6 - 0,9 mg/L, dan tidak ada kandungan garam (0 ppt). Sedangkan sifat mikrobologis mengandung bakteri coliform 11-28 MPN/ 100 mLr. Kondisi tersebut menunjukkan bahwa air gentong termasuk dalam kategori tidak layak konsumsi. Bakteri coliform yang teridentifikasi antara lain family Micrococcaceae, Lactobacilaceae, Streptococcaceae, Streptomycetaceae, Bacteroidaceae, dan Enterobacteriaceae.