Hantap (Sterculia oblongata R. Br.) merupakan salah satu tanaman obat yang berasal dari Indonesia. DNA barcoding diaplikasikan dalam kegiatan konservasi genetik dengan tujuan menjaga keragaman genetik. Region psbA-trnH digunakan sebagai barcode karena memiliki variasi pada tingkat spesies yang tinggi. Penelitian ini bertujuan menganalisis karakteristik sekuen psbA-trnH dari Hantap (S. oblongata) dan mengetahui peran sekuen psbA-trnH dalam kegiatan identifikasi sebagai upaya konservasi genetik Hantap (S. oblongata) di Indonesia. Data diperoleh dari isolasi DNA sampel S. oblongata koleksi Kebun Raya Bogor dengan mengikuti prosedur manual Plant Genomic DNA kit (TIANGEN). Siklus pada proses PCR dilakukan sebanyak 35 kali dan dilanjutkan dengan elektroforesis. Produk PCR disekuensing di 1st BASE DNA Sequencing Services, Singapura. Analisis data dilakukan menggunakan software Molecular Evolutionary Genetics Analysis X (MEGA X) dan BioEdit versi 7.2.6.1. Alignment dilakukan menggunakan ClustalW dan data dianalisis menggunakan Basic Local Alignment Search Tool (BLAST) pada laman National Center for Biotechnology Information (NCBI). Pohon filogenetik dikontruksi menggunakan metode statistik Maximum Parsimony dengan algoritma Subtree-Pruning-Regrafting (SPR) dan nilai bootstrap replications 1000. Hasil penelitian menunjukkan sekuen psbA-trnH dari Hantap (S. oblongata) memiliki karakteristik berupa panjang sekuen 350 bp dan persentase komposisi sekuen yang terdiri atas 39,7% nukleotida T; 13,7% nukleotida C; 30,6% nukleotida A; dan 16,0% nukleotida G. Analisis pohon filogenetik menunjukkan bahwa S. oblongata memiliki hubungan kekerabatan yang paling dekat dengan S. foetida (JX856944.1) dan memiliki hubungan kekerabatan yang jauh dengan S. lanceolata (KP095703.1). Karakteristik sekuen psbA-trnH dari Hantap (S. oblongata) sesuai dengan karakteristik sekuen psbA-trnH dengan rata-rata panjang sekuen ± 327 bp serta banyak mengandung nukleotida T dan A. Sekuen psbA-trnH memiliki peran dan memenuhi kriteria kegiatan identifikasi jenis berbasis molekuler sebagai upaya konservasi genetik Hantap (S. oblongata) di Indonesia.