HOTS masih belum banyak diberdayakan sehingga membuat rendahnya tingkat HOTS siswa di Indonesia. HOTS merupakan keterampilan dalam menyelesaikan masalah secara kritis dan logis. HOTS menjadi keterampilan yang perlu dimiliki setiap individu untuk dapat menyelesaikan masalah yang dialami secara cepat, kritis dan logis. Penelitian ini bertujuan untuk mengembangkan karakteristik dan mengetahui kelayakan E-modul biologi berbasis POGIL pada materi virus dan bakteri. Penelitian ini menggunakan model pengembangan 4D (Define, Design, Development, and Disseminate). Sampel uji coba produk pada 42 siswa IPA kelas X diambil secara acak. Hasil validasi dari para ahli yaitu ahli media, ahli POGIL, ahli materi, ahli bidang HOTS, serta guru biologi, yaitu, 83,3%; 85%; 82,5%; 86,2%; serta 88,6%. Keseluruhan hasil dari validasi ahli memiliki kualitas sangat layak. Tanggapan peserta didik terkait E-modul berbasis POGIL pada materi virus dan bakteri mendapatkan hasil sebesar 85, 3 % yang berkategori sangat layak. E-modul berbasis POGIL untuk melatih HOTS memudahkan guru dan siswa dalam mempelajari biologi terkhusus pada materi virus dan bakteri dan mampu membiasakan dan melatih siswa untuk berpikir pada tingkat lebih tinggi dan E-modul memiliki kategori sangat layak diaplikasikan menjadi sumber belajar siswa SMA/MA kelas X.