Rumput laut merupakan salah satu sumber daya hayati yang jumlahnya melimpah di perairan Indonesia. Rumput laut termasuk ke dalam komoditas perikanan yang memiliki potensi untuk dibudidayakan. Salah satu rumput laut yang mempunyai nilai ekonomis tinggi yaitu Gracilaria sp. Pemberian pupuk yang tepat bisa meningkatkan pertumbuhan serta kualitas rumput laut yang dibudidayakan. Pupuk PES (Provasoli’s Enriched Seawater) salah satu pupuk yang dikenal sebagai media kultur rumput laut yang berkualitas karena bisa mendukung pertumbuhan rumput laut serta meningkatkan kandungan senyawa metabolitnya. Namun, penelitian mengenai pengaruh pemberian pupuk PES pada pertumbuhan Gracilaria sp. belum diketahui. Penelitian ini bertujan untuk mengetahui pengaruh pemberian pupuk PES terhadap pertumbuhan Gracilaria sp. pada dosis yang berbeda serta mengukur dosis yang tepat untuk pertumbuhan optimal Gracilaria sp. Penelitian ini dilaksanakan selama 42 hari di Laboratorium Kultur Jaringan Rumput Laut BBPBAP Jepara. Penelitian ini menggunakan metode eksperimental dengan rancangan percobaan RAL (Rancangan Acak Lengkap). Dilakukan pengamatan berat dan panjang rumput laut seminggu sekali. Parameter kualitas air berupa salinitas, suhu, dan pH yang dilakukan setiap seminggu sekali. Setiap perlakuan menunjukkan hasil yang berbeda. Hal itu sesuai dengan hasil uji Kruskall Wallis menunjukkan hasil bahwa P < 0,05 yang berarti perlakuan pemberian pupuk PES dengan dosis yang berbeda memberikan pengaruh yang nyata terhadap pertumbuhan rumput Gracilaria sp. Pertumbuhan optimal Gracilaria sp. terjadi pada perlakuan B dengan dosis 10 mL/L dengan laju pertumbuhan berat 0,012076233 g/hari dan laju pertumbuhan panjang 0,00226724 g/hari.