Di Indonesia cabai menjadi salah satu tanaman hortikultura yang sangat penting. Cabai memiliki banyak macam kultivar, salah satunya cabai rawit (Capsicum frutescens L. ‘Rawit’). Kebutuhan cabai selalu mengalami peningkatan namun dalam produksinya masih belum mencukupi bahkan terjadi penurunan produktivitas. Penurunan ini dipengaruhi oleh beberapa faktor salah satunya serangan patogen penyebab penyakit. Pengendalian penyakit ini umumnya masih menggunakan fungisida sintetik yang memiliki dampak negatif. Oleh sebab itu diperlukan alternatif lain menggunakan biofungisida. Ajeran salah satu gulma yang memiliki kandungan senyawa metabolit sekunder sehingga dapat dimanfaatkan sebagai biofungisida. Tujuan dari penelitian ini untuk mengetahui efektivitas ekstrak daun ajeran sebagai biofungisida dalam menghambat pertumbuhan fungi Colletotrichum sp. Penelitian ini menggunakan RAL dengan 6 perlakuan (kontrol negatif, kontrol positif, 10%, 20%, 30%, 40%). Hasil penelitian menunjukkan bahwa ekstrak daun ajeran mampu menghambat pertumbuhan fungi Colletotrichum sp. Berdasarkan analisis data variasi konsentrasi tidak menunjukkan perbedaan yang signifikan. Namun pada pemberian ekstrak konsentrasi 30% menunjukkan nilai diameter pertumbuhan fungi paling rendah 2,09 cm dan persentase daya hambat 26,29% dengan aktivitas antifungi sedang.