Kemajuan teknologi yang ada saat ini berkembang dengan pesat khususnya di dunia pendidikan. Salah satu pemanfaatan kemajuan teknologi di dunia pendidikan adalah literasi digital. Penelitian ini mengukur pengetahuan kompetensi literasi digital siswa yang bersekolah di SMA Negeri 16 Semarang tentang pembelajaran biologi. Teknik analisis data menggunakan statistik deskriptif dengan menggunakan skala likert. Teknik pengambilan sampelnya menggunkan probability sampling dengan pengambilan sampel secara purposive sampling. Sampel dalam penelitian ini berjumlah 60 siswa dari kelas XI-1 dan kelas XI-5. Indikator pada penelitian ini ada 4 yaitu Pencarian internet (Internet Searching), Pandu arah hypertext (Hypertextual Navigation), Evaluasi konten informasi (Content Evaluation) dan Penyusunan pengetahuan (Knowledge Assembly). Hasil penelitian menunjukkan tingkat pengetahuan kompetensi literasi digital siswa pada pembelajaran biologi ada dalam kategori tinggi dengan presentase 71% yang mencakup 43 siswa dari total sampel 60 siswa Kompetensi indikator literasi digital berada pada kategori paling tinggi adalah kompetensi pencarian di intrernet (69,5%), sementara kompetensi lainnya masih berada pada kategori sedang yaitu pandu arah hypertext(65%), evaluasi konten (65.5%), dan penyusunan informasi (65,5%).