Kearifan lokal Kabupaten Pati merupakan salah satu sumber pengetahuan (kebudayaan) masyarakat yang didalamnya mengandung sejarah, aturan (pedoman) hidup, bernilai seni serta religius yang diterapkan dalam masyarakat di Kabupaten Pati. Tidak tersedianya bahan ajar berbasis kearifan lokal serta belum adanya penyampaian kearifan lokal sebagai contoh dalam materi pembelajaran, menjadikan peserta didik tidak mengetahui akan kearifan lokal yang dimiliki oleh Kabupaten Pati itu sendiri. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui kelayakan buku suplemen biologi berbasis kearifan lokal Kabupaten Pati sebagai penunjang materi keanekaragaman hayati kelas X SMA. Jenis penelitian ini adalah penelitian Research and Development (R&D). Persentase rata-rata yang didapat dari validator adalah sebesar 79,4% yaitu dengan kriteria layak. Saran dan masukan yang diberikan oleh validator digunakan sebagai bahan perbaikan buku suplemen biologi ini. Buku suplemen yang telah diperbaiki selanjutnya di uji cobakan kepada 6 guru pengampu matapelajaran biologi yang berasal dari berbagai sekolah yang tersebar di Kabupaten Pati agar diketahui kelayakan dari buku suplemen biologi yang dibuat, sehingga diperoleh persentase rata-rata sebesar 88,6% dengan kriteria sangat layak.