Penelitian ini dilatarbelakangi kurangnya inovasi dalam merancang rencana pembelajaran sehingga pembelajaran masih didominasi oleh pendidik serta pendidik yang belum memahami sepenuhnya penerapan kurikulum 2013 sehingga penilaian yang dilakukan belum komprehensif. Instrumen penilaian kompetensi inti keterampilan (KI-4) kurikulum 2013 dapat dijadikan solusi dalam memecahkan masalah tersebut. Instrumen penilaian yang dikembangkan diharapkan dapat meningkatkan objektifitas bagi guru dalam menilai kompetensi inti keterampilan peserta didik. Penelitian ini bertujuan untuk mengembangkan instrumen penilaian kompetensi inti keterampilan (KI-4) pada pembelajaran biologi kurikulum 2013 materi sistem peredaran darah manusia kelas VIII di SMP Negeri 3 Kendal, mengetahui tingkat kelayakan penggunaan instrumen penilaian tersebut. Jenis penelitian ini adalah research and development (R&D) mengacu pada model pengembangan 4-D (model Sivasailam Thiagarajan et all) Define, Design, Development, dan Disseminate. Setelah tahap Development dilakukan pengujian kelayakan oleh ahli media, ahli materi serta guru kemudian diuji tingkat kelayakannya menggunakan one way anova. Hasil penelitian menunjukkan memiliki kriteria layak (Baik) 80% (ahli materi), 86,67% (ahli media) dan 88,3% (guru) dengan kategori baik. Tingkat tanggapan peserta didik terhadap instrumen penilaian mencapai 84,49% dengan kategori layak digunakan. Berdasarkan perhitungan uji one way anova dengan nilai sig pada kinerja praktikum ke-1 adalah 0,554, kinerja praktikum ke-2 adalah 0,520, presentasi praktikum ke-1 adalah 0,573, presentasi praktikum ke-2 adalah 0,516, penyusunan laporan praktikum ke-1 adalah 0,164 dan penyusunan laporan praktikum ke-2 adalah 0,165. Jika dilihat maka nilai sig > 0,05 maka Ho diterima yang mengartikan bahwa tidak ada perbedaan rata-rata hasil penilaian dari tiga observer. Hasil tersebut menunjukkan bahwa instrumen penilaian yang dikembangkan layak untuk digunakan dalam pembelajaran.