Kelimpahan sedimen di lingkungan laut dapat memberikan kontribusi terhadap keberlangsungan dan keberlanjutan kehidupan serta keanekaragaman mikroorganisme seperti fungi yang bisa dimanfaatkan sebagai marine natural product. Fungi dalam siklus hidupnya membutuhkan lingkungan yang sesuai untuk tumbuh dan berkembang optimal. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengidentifikasi fungi serta menganalisis pengaruh suhu dan konsentrasi Malt Extract Broth (MEB) terhadap pertumbuhan fungi yang berasal dari sedimen Laut Muarareja Tegal. Pengujian konsentrasi MEB dibuat menjadi media padat dengan 3 konsentrasi MEB yaitu MEB normal, MEB 1/10 dan 1/100, sedangkan pengujian pengaruh suhu terdapat 6 suhu yaitu 100C, 250C, 300C, 350C, 400C dan 500C. Berdasarkan hasil pada penelitian ini menunjukkan bahwa isolat fungi yang diisolasi dari sedimen Laut Muarareja Tegal mampu tumbuh dengan baik pada konsentrasi MEB normal dan tergolong ke dalam kelompok fungi mesofilik karena dapat tumbuh pada suhu 25°C-40°C. Hasil identifikasi dari 14 isolat fungi asal sedimen Laut Muarareja Tegal didapatkan 3 genus fungi yaitu Aspergillus sp dengan warna koloni putih kekuningan, Trichoderma sp dengan warna koloni hijau gelap dan memiliki struktur garis konsentris yang teratur, Penicillium sp dengan warna koloni hijau terang dan tepi koloni berwarna putih. Genus-genus fungi yang ditemukan tersebut termasuk dalam divisi Ascomycota.