Citrobacter freundii adalah salah satu bakteri gram-negatif pada saluran usus manusia dan hewan yang menyebabkan penyakit diare. Daun sirih hijau mengandung kelompok metabolit sekunder seperti alkaloid, flavonoid, dan tanin. Ketiga metabolit sekunder tersebut dimungkinkan memiliki aktivitas antibakteri terhadap bakteri Citrobacter freundii. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui daya hambat dan Konsentrasi Hambat Minimum (KHM) ekstrak etanol daun sirih hijau terhadap pertumbuhan bakteri Citrobacter freundii. Metode yang digunakan dalam penelitian ini adalah metode cakram (disc diffusion) dengan kertas cakram (paper disc). Uji KHM dilakukan dengan menggunakan metode dilusi cair dengan instrumen spektrofotometer UV-Vis. Pada konsentrasi 2%, 4% dan 8% didapatkan diameter zona hambatnya sebesar 7,76 mm; 6,63 mm; dan 6,72 mm dengan hasil data yang fluktuatif. Uji KHM didapatkan pada konsentrasi 6,25% yang menunjukkan konsentrasi hambat minimum ekstrak etanol daun sirih hijau dalam menghambat pertumbuhan bakteri Citrobacter freundii. Namun hasil tersebut dikatakan kurang valid karena kurang akuratnya total larutan yang digunakan untuk uji KHM.